Методики виготовлення тимчасових мікропрепаратів

Науково-дослідницька діяльність – це діяльність, що пов’язана з розв’язанням творчих завдань із невідомим заздалегідь рішенням. Вона здійснюється за такими етапами:

• постановка проблеми;
• висування гіпотези;
• вивчення теоретичного матеріалу;
• збір матеріалу;
• добір методик;
• аналіз, узагальнення, висновки.

Добір способу дії, методики і методології дослідження – важливий етап роботи.

Методика (гр. metodike) – сукупність методів, прийомів проведення будь-якої роботи. Методика дослідження – це система правил використання методів, прийомів та операцій. Методологія – це концептуальний виклад мети, змісту методів дослідження, які забезпечують отримання максимально об’єктивної, точної, систематизованої інформації про процеси та явища. Методологічна основа дослідження не є самостійним розділом в науково-дослідницькій роботі, однак в розділах основної частини подають виклад загальної методики і основних методів дослідження.
Пошуки методологічних основ дослідження здійснюються за такими принципами:

• вивчення наукових праць відомих учених, які застосовували загальнонаукову методологію для вивчення конкретної галузі науки;
• узагальнення ідей науковців, які безпосередньо вивчали цю проблему;
• аналіз наукової і практичної діяльності українських учених і практиків у цій сфері;
• вивчення наукових праць зарубіжних учених і практиків.

Стратегічні методологічні положення і принципи знаходять своє тактичне втілення у методах дослідження. Науково-дослідницька робота, як і будь-яка діяльність людини, передбачає використання різноманітних методів опанування дійсності.
Метод (грец. methodos – спосіб пізнання) – спосіб досягнення мети, сукупність прийомів і операцій теоретичного, практичного освоєння дійсності, підпорядкованих вирішенню певного конкретного завдання.
На практиці метод реалізується як сукупність прийомів, операцій, спрямованих на теоретичне відображення або практичне опанування об’єкта пізнання, діяльності.
Вибір конкретних методів дослідження диктується характером фактичного матеріалу, умовами і метою певного дослідження. Методи є упорядкованою системою, в якій визначається їх місце відповідно до конкретного етапу дослідження, використання технічних прийомів і проведення операцій із теоретичним і фактичним матеріалом у заданій послідовності.
Морфологічну будову квітки та плоду можна вивчати на тотальних препаратах поперечних і поздовжніх зрізах виготовлених за допомогою леза. Анатомічну структуру плоду та квітки можна вивчати за допомогою поперечних та поздовжніх зрізів на тимчасових препаратах, підготовлених у воді на предметному скельці. На тимчасових препаратах проводиться реакція на здерев'яніння тканин за допомогою спиртового розчину флороглюцину та 10% соляної кислоти. Анатомічні зрізи розглядаються при збільшеннях окуляру х4 та х10 під світловим мікроскопом AMSCOPE T490B-10M (США).
Для виготовлення постійних мікроскопічних препаратів зрізів квітки використовуються класичні методики просочення рослинного матеріалу парафіном. Фіксатор із відпрепарованих квіток відмиють 70% спиртом із застосуванням вакуум-інфільтрації в ексикаторі за допомогою насоса Комовського. Зрізи виготовляються завтовшки 15-20 мкм за допомогою ротаційного мікротома МПС – 2 (СРСР) згідно з протоколом.
Зневоднення матеріалу й просочення його парафіном здійснюється з використанням трет-бутанолу, як розчинника парафіну (Paraplast, Merck®) у серії реагентів. Блоки для різання виготовляються методом закрапування, який дає можливість точно орієнтувати об'єкт (Паушева, 1988). Зрізи наклеюються у певній послідовності на змочені дистильованою водою предметні скельця без використання клеючих речовин. Використовується контрастне подвійне фарбування зрізів барвниками астраблау (Astra Blau, Merck®) (синє забарвлення протопласту і нездерев'янілих клітинних оболонок) і сафраніну (Safranin, Sigma-Aldrich®) (червоне забарвлення ядерець і здерев'янілих клітинних оболонок) у батареї для фарбування зрізів, яка складається з 14 різних резервуарів. Зрізи були заключаються в спеціальний клей еукіт (Eukitt®, Sigma-Aldrich®).